Kit de Detecção de Pirogênio LumiMAT™

Este kit é para o Teste de Ativação de Monócitos (MAT) para detectar pirogênios. Pirogênio é um termo genérico para substâncias que causam aumento da temperatura corporal em animais. Os medicamentos parenterais e dispositivos médicos que entram em contato com o sangue devem estar livres de pirogênios. O primeiro teste desenvolvido para detectar uma ampla gama de pirogênios foi o Teste de Pirogênio de Coelho (RPT). No RPT, as amostras a serem testadas são administradas por via intravenosa a coelhos e a temperatura corporal é monitorada. Uma vez que o RPT possui problemas com reprodutibilidade, precisão e custo, o reagente Lisado de Amebócito Limulus (LAL) tem sido amplamente utilizado como substituto. No entanto, o reagente LAL não pode detectar pirogênios não-endotoxina, e o RPT ainda é usado no caso de o reagente LAL não ser apropriado.

O MAT é um teste de pirogênio in vitro desenvolvido como uma alternativa ao RPT e pode detectar não apenas endotoxinas, mas também pirogênios não-endotoxina. 

CARACTERÍSTICAS PRINCIPAIS

• Ensaio com células NOMO-1 repórter
• Teste rápido (5 horas)
• Ensaio repórter conveniente
• Somente adicione o substrato luminescente à placa após a incubação
• Linhagem celular repórter estável
• Linhagens celulares que expressam de forma estável genes repórter
• Alta reprodutibilidade com menor variação lote a lote
• Fornecimento estável do banco de células mestre

COMPONENTES DO KIT 

*Tanto o Kit de Detecção de Pirogênio LumiMAT™ - Células como o Conjunto de Reagentes são necessários para um ensaio.

PRINCÍPIO DO ENSAIO

O MAT é usado para detectar pirogênios que ativam monócitos humanos para liberar citocinas inflamatórias.

MAT Convencional

Cultura de PBMCs (células mononucleares do sangue periférico) e amostras a serem testadas em placa de micropoços. As citocinas liberadas 

LumiMAT™

LumiMAT™ usa uma linhagem celular monocítica NOMO-1 na qual um gene repórter de luciferase é introduzido para expressar a proteína luciferase em resposta a sinais de NF-kB ativados pela exposição a pirogênios. Como a luciferase expressa gera luminescência reagindo com o substrato, a luminescência pode ser detectada por um leitor de microplacas de luminescência para detectar pirogênios nas amostras. 

FLUXO DO ENSAIO

Adicione amostras a serem testadas ou endotoxina padrão em uma microplaca e adicione as células repórter e incube por 3 horas. Após a incubação, adicione o substrato luminescente para medir a luminescência com um leitor de placas. Em comparação com ELISA, este é um ensaio simples de uma placa que suprime variações entre testes. Além disso, os resultados podem ser obtidos em cerca de 5 horas, o que é significativamente menor do que os 1,5 dias exigidos pelo método convencional.