Necessidade de Métodos Rápidos de Detecção de Endotoxinas para Fabricantes de Radiofármacos

Os radiofármacos são agentes radioativos utilizados para fins diagnósticos ou terapêuticos. Esses agentes são introduzidos no corpo humano, servindo a um propósito específico, como aumentar o contraste^[1]. Devido à injeção direta desses fármacos no corpo humano, torna-se imperativo monitorá-los quanto a quaisquer sinais de contaminação por pirogênio.

A endotoxina bacteriana é um pirogênio altamente poderoso que induz a febre. Bactérias gram-negativas (GNB) são a única origem dela, com endotoxinas representando aproximadamente 75% da parede celular de GNB. A contaminação bacteriana na água e nas superfícies normalmente inclui GNB, resultando na onipresença da endotoxina.^[2]

Teste de Pirogênio

O objetivo da realização de testes de pirogênio é manter um nível seguro e aceitável do risco de febre causado por uma injeção farmacêutica. Embora seja possível produzir equipamentos e recipientes de armazenamento de fármacos livres de pirogênio, a remoção completa de pirogênios de preparações farmacêuticas prova ser um desafio intransponível, uma vez que esses produtos químicos contêm inerentemente vestígios de pirogênios. Em baixos níveis de traço dessas fontes, geralmente medindo menos de 0,2 unidades de endotoxina/mL de injetado, não têm o potencial de induzir uma resposta de febre em pacientes^[3].

Para cumprir os regulamentos da FDA, quaisquer produtos farmacêuticos destinados ao uso parenteral em humanos, radioativos ou não, devem ser submetidos à certificação para garantir a esterilidade e a ausência de pirogênios. Essas certificações devem seguir os procedimentos do Teste de Endotoxina Bacteriana (BET) especificados na Farmacopeia dos Estados Unidos (USP <85>)^[3].

Significância do teste LAL em Radiofármacos

A USP <85> inclui uma descrição específica do ensaio LAL para teste de endotoxina no contexto de radiofármacos. O teste LAL é conduzido pela reação do sangue do Limulus, uma espécie de caranguejo-ferradura, com endotoxina bacteriana, resultando na formação de um coágulo de gel. Os kits de teste LAL que estão atualmente disponíveis incluem os métodos turbidimétrico, cromogênico e de gel-coágulo deste ensaio.

O teste LAL provou ser 5 vezes mais sensível do que o teste de coelho para detecção de pirogênio. Com sua sensibilidade aumentada, o Teste LAL é particularmente desejável para testar fármacos a serem administrados por via intratecal. Isso ocorre porque a endotoxina introduzida diretamente no líquido cefalorraquidiano é pelo menos 1.000 vezes mais potente do que se for administrada por via intravenosa.^[3]

A USP <85> define especificamente os limites de endotoxina para radiofármacos em 14 UE por dose, se administrados por via intratecal, ou 175 UE por dose, se administrados por qualquer outra via.^[4] Os radiofármacos fornecem um desafio único ao teste de endotoxinas, pois possuem ingredientes com vida útil extremamente curta. A orientação <825> da USP sobre radiofármacos descreve a necessidade de testes rápidos desses produtos. Especificamente, a orientação exige que o BET seja executado antes da distribuição se todos os ingredientes não tiverem sido previamente certificados como livres de endotoxinas.^[5] Esta restrição de tempo não permite o tempo de resultado de 60 min da técnica de gel-coágulo. As técnicas de detecção rápida de endotoxinas são, portanto, imperativas no teste bem-sucedido de radiofármacos.

Modificações no Ensaio LAL para Radiofármacos

Devido à presença de agentes quelantes em radiofármacos marcados com 99mTc, há uma chance significativa de resultados falso-negativos. Esses agentes reduzem a concentração de íons de cálcio divalentes livres no reagente LAL, levando à inibição da formação de gel de coagulina e potencialmente causando um resultado falso negativo.

A adição de uma solução de cloreto de cálcio pode ser empregada como um meio para abordar a inibição observada em um ensaio LAL empregado para radiofármacos marcados com 99mTc e seus kits refrigerados que possuem SH livre, COOH livre ou ambos esses grupos.

Hospitais e farmácias centrais de rádio agora contam com essa adaptação modificada do método de teste LAL para realizar testes de controle de qualidade em seus radiofármacos e kits refrigerados.^[6]

Para tornar os testes rápidos sem comprometer a precisão, novos desenvolvimentos foram implementados. O sistema CMD αBET™ é um avanço tecnológico recém-desenvolvido que está em conformidade com os regulamentos da FDA. É uma opção fácil de usar e portátil para testes de pirogênio, oferecendo uma alternativa mais rápida aos métodos tradicionais. O sistema utiliza o reagente LAL altamente eficiente para testes e tem tempos de execução variados dependendo da concentração da amostra, variando de 3 minutos para uma amostra de 10 UE/mL a 30 minutos para amostras com 0,001 UE/mL.

Fontes de literatura

1. Munjal, A. and N. Gupta, Radiopharmaceuticals, in StatPearls. 2024, Direitos Autorais da StatPearls Publishing © 2024, StatPearls Publishing LLC.: Treasure Island (FL) empresas inelegíveis. Divulgação: Nishant Gupta declara não ter relações financeiras relevantes com empresas inelegíveis.
2. Cooper, J.F. and J.C.J.U.o.N.M. Hung, Health Sciences Center, College of Pharmacy, Bacterial endotoxin test and sterility test for radiopharmaceuticals. 2008. 14(5): p. 30-35.
3. Karesh, S.M.J.J.o.n.m.t., Sterility and pyrogen testing of radiopharmaceuticals. 1989. 17(3): p. 156-159.
4. <85>Teste de endotoxina bacteriana, Farmacopeia dos Estados Unidos.
5. <825> Preparação, composição, distribuição e reembalagem de radiofármacos, >Farmacopeia dos Estados Unidos.
6. Mitra, A., et al., Limulus amebocyte lysate testing: adapting it for determination of bacterial endotoxin in 99mTc-labeled radiopharmaceuticals at a hospital radiopharmacy. J Nucl Med Technol, 2014. 42(4): p. 278-82.