Aplicações potenciais do caranguejo-ferradura no desenvolvimento de produtos para saúde

O Caranguejo-Ferradura do Atlântico, como geralmente o Limulus polyphemus é conhecido, existe há mais de 200 milhões de anos. A sua classificação está localizada, desde o século XIX, no filo Arthropoda e não nos crustáceos, conforme ocorreu inicialmente. Este parente próximo dos aracnídeos foi colhido historicamente para o uso como fertilizante ou isca, e mais recentemente para a extração do sangue para o Teste do Lisado de Amebócito Limulus (LAL), utilizado para a detecção de endotoxinas bacterianas em produtos farmacêuticos e em outras aplicações médicas.

 O Limulus polyphemus joga um rolo vital na medicina humana. É um modelo para o estudo do sistema imunológico inato. Como invertebrado que não possui imunoglobulinas, desenvolveu um mecanismo único para detectar e responder aos antígenos da superfície microbiana como os lipopolissacarídeos (LPS), ácidos lipoteicóicos, lipoproteínas, peptideoglicanos (PGN) e 1,3-β-glicanos. Esta é a coagulação da hemolinfa. As células sanguíneas do Limulus, denominadas amebócitos, se coagulam na presença de antígenos da superfície microbiana mencionados previamente. Esta reação de coagulação da hemolinfa é certamente o princípio bioquímico do chamado Teste do Lisado de Amebócito Limulus (LAL).

Embora o maior uso do teste LALseja para a detecção dos LPS em produtos farmacêuticos, seu uso se estende ao diagnóstico de endotoxemia associada à cirrose, câncer, meningite, doenças oculares, problemas dentais, doenças venéreaa, infecções do trato urinário, assim como na análise da qualidade das águas. No dia de hoje, continuam encontrando novas aplicações para o teste LAL como por exemplo, na deteção de contaminação bacteriana nos alimentos, incluindo congelados.

A Wako Chemicals, uma empresa distribuidora de reagentes para a pesquisa, possui uma instalação de sangria do Limulus polyphemus autorizado pelo FDA dos EUA para a formulação única de um reagente LAL específico para endotoxina bacteriana sem a interferência de beta glicanos nas amostras. Esta empresa reconhecida a nível internacional possui em seu catálogo uma série de reagents e acessórios LAL que cumprem todas as normas, regulamentos e padrões de qualidade estabelecidos pelo FDA sob a marca PYROSTAR™.

Os reagentes da marca PYROSTAR™, como o Teste Único de Limulus PS, permitem a detecção e quantificação de endotoxinas sem a interferência de substâncias coexistentes mediante o uso de um adsorvente de afinidade para a endotoxina denominado Pyrosep™. A série Pyrostar™ ES-F é uma formulação única que contém Curdlan carboximetilado (CMC) coliofilizado com o LAL, com o objetivo de eliminar a interferência com β-glicanos. A Wako foi a primeira a usar estas descobertas por meio do desenvolvimento de um tampão ES que contém altas concentrações de CMC, convertendo o reagente LAL especificamente para a endotoxina.

Além disso, os pesquisadores podem encontrar a Água livre de endotoxina e o Controle Padrão de Endotoxina, Solução extratora de endotoxina para testes de LAL, para a extração de endotoxinas que não podem ser extraídos pela água ou solução salina, Toxinometer ET-6000 com software Toximaster QC7, um leitor cinético para um trabalho eficiente e uma análise de dados de alta qualidade que podem incorporar os 3 métodos de medição: coagulação por gel, KTA (turbidimétrico)e KCA (cromogênico), entre outros acessórios livres de endotoxina.

Bibliografia:

1) Iwanaga, S. (2007). Biochemical principle of Limulus test for detecting bacterial endotoxins. Proceedings of the Japan Academy , Series B, 83 (4), 110-119.

2) Kumar, V., Roy, S., Sahoo, A. K., & Kumar, V. (2016). Horseshoe crabs: biomedical importance and its potential use in developing health-care products. Indian Journal of Geo-Marine Sciences , 45 (10), 1234-1244.

3) Smith, D. R., Brockmann, H. J., Beekey, M. A., King, T. L., Millard, M. J., & Zaldivar-Rae, J. (2017). Conservation status of the American horseshoe crab,(Limulus polyphemus): a regional assessment. Reviews in Fish Biology and Fisheries , 1-41.

ACESSÓRIOS LAL PARA TESTE DE ENDOTOXINA BACTERIANA:

PYROSTAR™ ES-F Único Teste Vial	Teste de Limulus PS Wako	Limulus Color KY Series