A Detecção de Endotoxinas via Teste LAL - Método Gel-Coágulo
A pirogenicidade pode ser observada em uma ampla gama de cenários, abrangendo materiais, processos de produção e a administração parenteral. Exemplos de produtos que podem exibir pirogenicidade inerente incluem adjuvantes em vacinas e lipopeptídeos sintéticos.
A introdução de pirogênios, como endotoxinas bacterianas, na corrente sanguínea humana pode levar a sintomas como febre, inflamação e potencialmente choque séptico. A membrana externa das bactérias Gram-negativas é uma fonte importante de endotoxinas, e essas bactérias podem ser encontradas em quase todo o ambiente. Como resultado, é necessário realizar testes regulares para endotoxinas em dispositivos médicos e produtos farmacêuticos destinados ao uso parenteral. [1]
Quais são os métodos para detectar pirogênios?
Vários métodos de detecção de pirogênio incluem o ensaio RPT (Teste de Pirogênio de Coelho), MAT (Teste de Ativação de Monócitos) e LAL (Lisado de Amebócitos de Limulus). O ensaio LAL ganhou ampla aceitação por órgãos reguladores, como FDA e farmacopeias internacionais.
O ensaio LAL tem sido recomendado pelos pesquisadores como uma técnica valiosa para determinar os níveis de endotoxinas e carga bacteriana na qualidade da água. O objetivo principal do ensaio LAL é monitorar diligentemente a presença de endotoxina na água usada para esterilizar dispositivos médicos reutilizáveis em procedimentos cirúrgicos. Esta análise tem a capacidade de detectar até mesmo os traços mais minúsculos da molécula, atingindo níveis tão baixos quanto alguns picogramas. [2]
Entre os métodos de LAL, o método do gel-coágulo é o mais comumente usado. Este teste depende de uma reação de coagulação entre a endotoxina e o lisado para determinar sua presença ou ausência.
Método de Gel-Coágulo LAL
Desde sua aprovação pela FDA na década de 1970, o teste LAL de gel-coágulo tem sido amplamente adotado como o meio oficial de detecção de endotoxinas bacterianas. A base do teste LAL está na resposta de coagulação de um complexo enzimático obtido das células de caranguejo-ferradura, quando exposto a endotoxinas bacterianas.[3]
Em conformidade com a norma ANSI/AAMI ST108:2023, o nível de endotoxina da Água Crítica usada para reprocessamento, esterilização e enxágue não deve exceder 10 UE/ml. Para cumprir com esta norma, são necessários testes mensais.[4]
Entre os vários métodos LAL, a abordagem mais direta é a utilização dos kits de teste único e multiteste PYROSTAR™ ES-F no método de gel-coágulo LAL, que oferece sensibilidades que variam de aproximadamente 0,015 a 0,25 UE/mL. Esta ferramenta desempenha um papel vital em permitir que instalações de saúde, empresas farmacêuticas e outras indústrias confirmem a ausência de endotoxinas em seus produtos e ambientes.[5]
Os procedimentos de fabricação de dispositivos médicos devem obedecer rigorosamente aos controles especificados pela Associação para o Avanço da Instrumentação Médica (AAMI). A pirogenicidade pode surgir da potencial liberação de produtos químicos ou materiais adicionais por dispositivos médicos, como materiais para curativos ou microcápsulas de alginato. Como esses dispositivos interagem diretamente com o sangue e a linfa, é crucial confirmar sua natureza livre de pirogênios. Quando se trata de detecção de pirogênios, o teste LAL é um método comumente utilizado.
Referências:
- Mehmood, Y., What Is Limulus Amebocyte Lysate (LAL) and Its Applicability in Endotoxin Quantification of Pharma Products. 2019.
- Daneshian, M., et al., High sensitivity pyrogen testing in water and dialysis solutions. J Immunol Methods, 2008. 336(1): p. 64-70.
- Meisel, J., Determination of Pyrogens: Comparison of Different Methods. Altex, 1995. 12(2): p. 89-92.
- Vockley, M.J.J.o.C.E., AAMI Publishes First National Standard on Water Quality for Medical Device Processing. 2024. 49(1): p. 30-31.
- Dobrovolskaia, M.A., et al., Ambiguities in applying traditional Limulus amebocyte lysate tests to quantify endotoxin in nanoparticle formulations. Nanomedicine (Lond), 2010. 5(4): p. 555-62.
