10 cenários onde o teste LAL pode ser usado

Publicado em 15th October 2021

As endotoxinas causam inflamação e febre, e têm sido implicadas na patogênese da sepse. São componentes importantes da membrana externa das bactérias gram-negativas e são onipresentes do ponto de vista ambiental. A administração parenteral de endotoxinas está associada a efeitos adversos muito graves e potencialmente desastrosos. Portanto, a triagem de endotoxinas é realizada rotineiramente na indústria farmacêutica, bem como no contexto de pesquisa. O teste do lisado de amebócito Limulus (LAL) é o teste mais amplamente utilizado para avaliação de endotoxinas com validade e confiabilidade comprovadas. Baseia-se na incubação de um extrato de amebócito do caranguejo-ferradura com uma amostra contendo endotoxina, o que leva à formação de um coágulo.1

Aqui estão dez dos cenários, nos quais o teste LAL tem sido amplamente utilizado:

1. Para triagem de soluções injetáveis - Os produtos farmacêuticos injetáveis devem obedecer a limites muito restritos para o conteúdo de endotoxinas. A contaminação por endotoxinas de soluções injetáveis deve ser evitada a todo custo, pois provocaria fortes efeitos adversos, principalmente quando os produtos são administrados por via intravenosa.2 Quando nenhuma substância interferente está presente em uma formulação de medicamento, o teste de LAL deve ser realizado usando amostras não diluídas.3

2. Em centros de diálise renal - Tanto a água quanto as soluções de dialisante usadas para diálise renal devem cumprir rígidas regulamentações de qualidade, incluindo limites de endotoxina, porque os contaminantes podem levar a resultados adversos muito graves para o paciente.4

3. Para triagem de dispositivos médicos - Certos dispositivos médicos, como válvulas cardíacas porcinas ou dispositivos ortopédicos complexos, apresentam o risco de contaminação por endotoxinas.2 Os limites regulamentares estritos para endotoxinas dependem do uso pretendido do dispositivo e dos tecidos com os quais ele entra em contato. Os dispositivos podem ser lavados, imersos ou desmontados para preparar os eluatos para o teste.3

4. Para avaliar fármacos recombinantes - Os fármacos recombinantes também podem estar contaminados com endotoxinas. Isso é especialmente verdadeiro para fármacos recombinantes produzidos em E. coli, que requerem uma etapa de remoção de endotoxina. A contaminação e remoção de endotoxinas podem ser avaliadas com o teste LAL.5

5. Avaliação de produtos terapêuticos biológicos - Determinados produtos terapêuticos biológicos, como insulina, fatores de coagulação e algumas vacinas, também estão em risco de contaminação por endotoxinas e devem ser testados.6

6. Para avançar na pesquisa de endotoxinas - As endotoxinas e os mecanismos implicados em seus efeitos são um assunto de investigações ativas. A avaliação de endotoxinas usando o teste LAL é uma parte importante da pesquisa de endotoxinas.2

7. Para triagem de candidatos a fármacos antiendotoxinas – Como as endotoxinas têm fortes efeitos pirogênicos, o desenvolvimento de fármacos antiendotoxinas otimizados é uma importante área de pesquisa. O teste LAL permite a triagem de candidatos a fármacos antiendotoxinas antes que possam progredir para as fases de desenvolvimento de fármacos.2

8. Para testar o equipamento de laboratório - Para garantir resultados de pesquisa confiáveis, o equipamento de laboratório deve estar livre de contaminação por endotoxina. Portanto, o teste LAL pode ser usado para testar endotoxinas em material de laboratório, se houver suspeita de contaminação.

9. Para analisar a água do mar - A água do mar e os sedimentos marinhos contêm endotoxinas. Além disso, a medição de endotoxinas com o teste LAL pode servir como um indicador do conteúdo bacteriano da água do mar.2,7

10. Para triar a contaminação do ar por endotoxinas - A inalação de endotoxinas pode causar disfunção das vias aéreas e inflamação. Este problema surge mais comumente devido à exposição ocupacional, mas também pode ocorrer em áreas próximas a fontes emissoras de endotoxinas.

 

Fontes de literatura:

  1. https://www.fda.gov/inspections-compliance-enforcement-and-criminal-investigations/inspection-technical-guides/bacterial-endotoxinspyrogens
  2. Novitsky TJ. Biomedical applications of Limulus Amebocyte lysate. J.T. Tanacredi et al. (eds.), Biology and Conservation of Horseshoe Crabs, DOI 10.1007/978-0-387-89959-6_20, Springer Science+Business Media, LLC 2009
  3. FDA. Guidance for industry: pyrogen and endotoxins testing: questions and answers. June 2012.
  4. Coulliette AD, Arduino MJ. Hemodialysis and water quality. Semin Dial. 2013;26(4):427-38. doi: 10.1111/sdi.12113.
  5. Sandle T. Removal of endotoxin from protein in pharmaceutical processes. American Pharmaceutical Review. 2016, July 29.
  6. Trivedi B, Valerio C, Slater JE. Endotoxin content of standardized allergen vaccines. J Allergy Clin Immunol. 2003;111(4):777-83. doi: 10.1067/mai.2003.1338.
  7. Sattar AA, Jackson SK, Bradley G. The potential of lipopolysaccharide as a real-time biomarker of bacterial contamination in marine bathing water. J Water Health 2014;12(1):105–112. doi: https://doi.org/10.2166/wh.2013.142