La importancia de contar con los accesorios adecuados para realizar el ensayo LAL

El ensayo LAL (Lisado de Amebocitos de Limulus) permite la determinación de lipopolisacáridos de origen bacteriano. Las moléculas de lipopolisacáridos que se encuentran en la pared celular externa de las bacterias Gram negativas, también llamadas endotoxinas bacterianas, se liberan cuando se produce la lisis de las bacterias. Estas sustancias tienen una gran toxicidad y son muy estables, por lo que pueden provocar daños al entrar en contacto con otros organismos vivos.

Los lipopolisacáridos son moléculas complejas que en la hemolinfa del cangrejo Limulus Polyphemus, conocido como cangrejo herradura o cangrejo del Pacífico, provocan que comience una serie de reacciones en cascada que terminan en la coagulación de la hemolinfa como medio de defensa para que no penetren las endotoxinas.

Las bacterias Gram negativas viven en la mayoría de ambientes que conocemos, tanto en el exterior como en el interior de los organismos vivos y pueden actuar como patógenos o no, cuando están vivas. Debido a que el material con el que se trabaja para realizar el ensayo de LAL también es susceptible a estar contaminado con bacterias Gram negativas, es de suma importancia contar con accesorios y reactivos específicos para el ensayo, que eviten la obtención de resultados positivos falsos.

Wako tiene en el mercado la línea de productos PYROSTAR™ que consta de los kits pàra realizar el ensayo de determinación de lipopolisacáridos, así como de todos los accesorios y material necesarios para llevar a cabo el ensayo de LAL. Entre los productos PYROSTAR™ está el agua libre de endotoxinas, recomendada para usar en la reconstitución de los reactivos liofilizados y en todos los pasos del ensayo en que se precise alguna dilución con agua. También se recomienda utilizar las puntas de pipeta y tubos de la serie BioClean, que ofrecen la garantía de no estar contaminados con bacterias.

Entre los reactivos que se incluyen en la marca PYROSTAR™ están la Solución extractora de endotoxinas y la Endotoxina de Control Estándar, esta última necesaria para construir la curva de calibración cuando se pretendan hacer determinaciones cuantitativas de endotoxinas mediante el ensayo de LAL. El equipo que ofrece Wako para medir la formación del gel o el desarrollo de color en los tubos donde se realiza el ensayo de LAL es el Toxinometer® ET-6000.

Además de la posibilidad de obtener resultados falsos positivos por contaminación del material del ensayo con endotoxinas, también se puede dar el caso de que la presencia de beta glucanos altere el resultado de este ensayo. El efecto de estos interferentes en la determinación de endotoxinas bacterianas se elimina, en los test de la compañía Wako porque todos ellos contienen un derivado del curdlan en una concentración alta. Esta sustancia impide que los beta glucanos desencadenen las reacciones que conducen a la formación de la coagulina en el ensayo de LAL, que es la señal analítica que permite usar el lisado de amebocitos de Limulus en la detección de lipopolisacáridos.

ALGUNOS REACTIVOS LAL DE LA MARCA PYROSTAR™

Ensayo simple de Limulus PS	PYROSTAR™ ES-F Prueba vial única	Kit KY color Limulus