La importancia de contar con la marca PYROSTAR™ en las investigaciones con fármacos

La marca PYROSTAR™ de la división LAL de Wako se especializa en reactivos para la detección de endotoxinas bacterianas. Las endotoxinas bacterianas, provenientes de la pared celular de las bacterias Gram negativas son una de las principales y más peligrosas fuentes de contaminación de los fármacos.

Lo que se conoce como endotoxinas bacterianas son los lipopolisacáridos (LPS) que forman parte de la membrana externa de las bacterias Gram-negativas. Estos lipopolisacáridos tienen un efecto tóxico en mamíferos, produciendo episodios de fiebre y shock séptico que pueden conllevar a la muerte. Por ello la industria farmacéutica demanda métodos para el control de las endotoxinas en los productos terminados y todos los reactivos y útiles usados en la producción de medicamentos, que aseguren que no contienen endotoxinas en rangos peligrosos. Así mismo las investigaciones con fármacos requieren realizar este control en sus productos antes de llevar a cabo ensayos clínicos y preclínicos. Como el método de LAL es el recomendado por las autoridades farmacéuticas para determinar endotoxinas este mismo ensayo es el que utilizan los investigadores. Con el fin de proveer reactivos y accesorios con los que realizar el ensayo de LAL, para las investigaciones en fármacos y otras ramas biomédicas, Wako ha lanzado la marca PYROSTAR™.

CONOZCA LAS Aplicaciones del ensayo de LAL en la industria farmacéutica

Uno de los accesorios más importantes de la marca PYROSTAR™ es el Toxinometer® (toxinómetro), instrumento fotométrico diseñado especialmente para medir el cambio en la turbidez que se produce al mezclar una muestra susceptible de contener endotoxinas, al ser mezclada con los reactivos del ensayo de Limulus. El nombre del test de Limulus, proviene de que este ensayo se realiza con un lisado de amebocitos de la hemolinfa del cangrejo Limulus Polyphemus, por lo que se le conoce como ensayo de Limulus o ensayo de LAL, por sus siglas en inglés Limulus amebocyte lysate.

Entre los productos con que cuenta la marca PYROSTAR™ se encuentran los test que miden la presencia de endotoxina por los diferentes métodos de detección que se han desarrollado a lo largo de los años. Los test de determinación de endotoxinas son los que se describen a continuación:

• Kit KY color Limulus: En este caso la detección de endotoxinas se realiza mediante el método colorimétrico.

• Ensayo simple de Limulus PS: Es otro de los reactivos de la marca PYROSTAR™ y consiste en una única prueba de endotoxinas, donde las endotoxinas se absorben en una resina llamada Pyrosep™ diseñada con este fin, y luego son medidas usando el Toxinómetro de Wako. La importancia de este test es que la muestra se puede disolver en solventes orgánicos para ser absorbida en la resina por lo que puede utilizarse para muestras no solubles en agua como pueden ser las vitaminas liposolubles.

• PYROSTAR™ ES-F Prueba vial única: Al igual que en el caso anterior es un vial con el que puede realizarse un único ensayo de determinación de endotoxinas, pero puede adquirirse también el producto que cuenta con 100 ensayos (Kit of 100 PYROSTAR™ ES-F), que puede adquirirse incluyendo o no endotoxina estándar, o en forma de vial que contiene los reactivos necesarios para realizar 4 ensayos. Con estos test la detección puede realizarse mediante gel-clot (o formación de gel) que sería una medición cualitativa o cuantitativamente por el método cinético turbidimétrico.

• Pyrostar ES-F Plate: Permite la medida de endotoxina usando un lector de microplacas.

En estos test de Limulus se añade curdlan carboximetilado para eliminar la interferencia que producen los β-1,3-glucanos en el ensayo. Los compuestos del tipo β-1,3-glucano, también forman parte de la pared celular de las bacterias, y son capaces de activar otra cascada de reacciones diferente a la que activan los lipopolisacáridos, pero que hacen que precipiten proteínas que forman un gel indistinguible del gel característico del ensayo de LAL.

El Curdlan es un β-1,3-glucano y añadido en exceso hace que otros glucanos, que puedan encontrarse en las muestras, no interfieran en las mediciones. Para adicionar el curdlan carboximetilado, a los reactivos del ensayo de LAL, en un principio se mezclaba como un buffer, pero posteriormente ya se ha logrado liofilizar conjuntamente con el resto de los reactivos. Por lo que, por ejemplo, al reconstituir el reactivo contenido en los viales PYROSTAR™ ES-F con el agua para el ensayo de lisado (LAL Reagent Water) ya se obtiene un reactivo para el ensayo de LAL específico para endotoxinas.

Otros reactivos que pueden encontrarse en el catálogo de la marca PYROSTAR™, útiles para la detección de endotoxinas en las investigaciones con fármacos, son:

• Solución extractora de endotoxinas para realizar los ensayos de LAL (Endotoxin Extracting Solution for LAL Test) que contiene albúmina de suero humana y permite realizar las extracciones de las muestras que van a ser analizadas con mayor fiabilidad que si se usa agua o solución salina.

• Tubos para la deteminación cualitatica de endotoxinas por formación de gel (Gel Clot Reaction Tubes).

• Endotoxina estándar de control (Control Standard Endotoxin) que contiene 500ng de endotoxina liofilizada purificada de la cepa de E. Coli UKT-B sy que sirve como patrón para los test de endotoxina.

• Agua para usar en el ensayo de LAL (Lysate Reagent Water) esterilizada y libre de endotoxinas.

• Tubos, tips para micropipetas y tapas de aluminio para los tubos de la serie BioClean® (BioClean® Series), todos ellos con la pureza necesaria para trabajar en ambientes libres de endotoxinas, donde se lleva a cabo el ensayo de LAL, y para realizar las mediciones con el toxinómetro.

OTROS PRODUCTOS QUE OFRECE PYROSTAR™

Kit de 4 PYROSTAR™ ES-F (2 ML) con (CSE)	Kit de 100 PYROSTAR™ ES-F (5.2 ML) sin (CSE)