Kits para el ensayo de LAL mediante el Método de Gel-Clot

El lisado de amebocitos extraídos del cangrejo herradura es capaz de detectar cantidades muy pequeñas de endotoxinas bacterianas, lo que hace que se puedan desarrollar kits con un límite de detección muy bajo. La señal analítica que se utiliza en el ensayo de LAL por el método Gel-Clot es la formación del gel.

El análisis cualitativo por el método de Gel-Clot es el más sencillo y económico, la formación del gel que indica la presencia de endotoxinas y por lo tanto el resultado positivo del test de LAL, se detecta a simple vista. El límite de detección del ensayo LAL, usando el método de Gel-Clot, está generalmente entre 0.01 y 0.03 unidades de endotoxinas por mililitro de disolución usada en el ensayo. Este límite de detección de los ensayos varía según el fabricante del kit que contiene el reactivo de LAL. Si la concentración de endotoxinas en el medio es menor que el valor del límite de detección que se esté utilizando, no llega a formarse y permanecer intacto con el movimiento, el gel sólido que aparece producto del contacto del lisado de amebocitos con las endotoxinas bacterianas. Por ello el análisis cualitativo de LAL se realiza girando el tubo de ensayo para comprobar que la turbidez formada es un gel, que no desaparece al mover el tubo. El método Gel-Clot puede usarse de manera cualitativa, dando resultados positivo o negativo si no se llega a formar el gel, y semicuantitativa.

DESTACADO: Uso del Método Gel-Clot en el ensayo de LAL

La serie de productos PYROSTAR ES-F, que tiene en el mercado la compañía Fujifilm Wako, es apta para la realización del ensayo de LAL por el método Gel-Clot cualitativo. La línea PYROSTAR ES-F tiene diferentes kits para realizar el ensayo en un solo tubo, en placas o a mayores escalas, cuando se necesita comprobar la pureza de una serie de muestras. Para eliminar la interferencia del β-1,3-glucano, otro polisacárido que se encuentra en la pared celular de bacterias y hongos, que en pequeñas cantidades puede interferir la medición de endotoxinas, estos kits contienen una cantidad de β-1,3-glucano, que al ser una mayor concentración que la que suele haber en los medios donde se realiza el análisis de endotoxinas, impide que este tipo de compuesto actúe como interferente. Los kits que comercializa Fujifilm Wako son para ser usados solamente en investigación, y aunque el procedimiento para realizarlos es sencillo deben ser manipulados por personal formado y con mucha precaución. Después de incubar los tubos donde se realiza el ensayo a 37 grados durante una hora, se giran los mismos boca abajo para comprobar si se formó o no el gel, por lo que de manera cualitativa se puede obtener el resultado del análisis.

Además de los kits para realizar el ensayo de LAL, la línea PYROSTAR cuenta con otros productos que permiten obtener los resultados con la mayor calidad. Por ejemplo, están los tubos de ensayo libres de pirógenos que se pueden adquirir con o sin tapa y son fabricados con borosilicatos de alta calidad; la Endotoxina de Control Estándar (CSE) que es un producto liofilizado compuesto de 500ng de la endotoxina purificada de la cepa de E. Coli UKT-B, y funciona como patrón para realizar las curvas de calibración de los ensayos LAL; el agua reactivo libre de endotoxinas para realizar los ensayos LAL y el Toxinometer® ET-6000.

LÍNEA DE PRODUCTOS LAL:

Kit de Reactivos LAL	Accesorios para Método LAL