Kits para el ensayo de LAL mediante el Método Turbidimétrico

La marca PYROSTAR posee diferentes kits para llevar a cabo el ensayo LAL, o sea la detección de endotoxinas bacterianas. Algunos de estos kits están diseñados para ser usados mediante métodos turbidimétricos de análisis. La señal analítica medible y cuantificable a través de estos kits es la turbidez formada en la disolución.

Cuando se aplica la turbidimetría como técnica analítica en los ensayos de LAL se mide la transmitancia de la luz que pasa a través de una disolución, debido al hecho que esta disminuye proporcionalmente a la cantidad de endotoxinas presentes. Este método se basa en la turbidez generada en la disolución al comenzar a formarse la coagulina, proteína insoluble responsable de la aparición de un gel en el tubo donde se lleva a cabo el ensayo. Teniendo patrones de endotoxina, podemos medir la turbidez por un método espectrofotométrico y esta medida nos permite cuantificar la cantidad de endotoxinas. Una de las ventajas de este método radica en que los ensayos pueden llevarse a cabo, de manera fiable, en un amplio rango de concentraciones de endotoxinas, pudiendo construir curvas patrones que lleguen hasta 100 unidades de endotoxinas por mililitro de disolución.

Los kits de la marca PYROSTAR para realizar el ensayo de LAL usando la turbidimetría, son rápidos y permiten realizar el ensayo a temperaturas superiores a las usuales. El Test Limulus ES-II y el PYROSTAR™ ES-F/Plate Reagent son un ejemplo de estos kits y cuyo fin es ser usados en laboratorios de investigación y no como métodos de diagnóstico.

Además, PYROSTAR ha desarrollado un equipo fotométrico que funciona como lector de placas y es útil para medir la velocidad del cambio en la turbidez de la disolución en el ensayo de LAL, es el Toxinometer® ET-6000. Con este equipo se pueden leer las placas cuando se utiliza el Kit PYROSTAR™ ES-F/Plate. Para realizar estos ensayos se construye una curva de calibrado que debe curbir entre 10 unidades menos y 10 más de endotoxinas que las que se estima que contengan las muestras. Además, para asegurar medidas de calidad suficiente, se miden controles positivos y negativos y todas las muestras se miden por duplicado. Después de añadir el reactivo PYROSTAR™ ES-F/Plate a las muestras, se toman los datos cada 40 segundos, a 405 nm y a 37 ºC de temperatura de todos los pocillos de la microplaca. Con el lector de microplacas se monitorea la turbidez de las muestras y se determina el tiempo de aparición, luego con los datos de transmitancia obtenidos el software permite calcular la curva de regresión y determinar la concentración de endotoxinas. Este ya tiene añadido el Curdlan (β-1,3-glucano) cuya función es eliminar la interferencia de este tipo de compuestos en el ensayo. Otro de los reactivos necesarios para realizar estos ensayos es la Endotoxina de Control Estándar, obtenida a partir de cepas de E.Coli UKT-B, que sirve de patrón para las disoluciones control y para obtener las curvas de calibración. Una vez reconstituido el reactivo solo puede almacenarse a 2-10° C durante 1 mes.

CONOZCA ALGUNOS ACCESORIOS DE LA MARCA PYROSTAR™

Tubos de disolución sin endotoxinas	Paquete de software Toximaster QC7	Placas Wako BioClean®