Elegir el mejor método de detección para su ensayo LAL

El ensayo de Lisado de Amebocito Límulus (LAL) es el método más popular para la cuantificación de niveles de endotoxinas bacterianas. Las endotoxinas son lipopolisacáridos que se encuentran en la membrana de las bacterias gramnegativas. Dado que las endotoxinas pueden provocar reacciones inflamatorias peligrosas al entrar en contacto con el cuerpo humano, el ensayo LAL es una parte vital del control de calidad en numerosos sectores de productos como los medicamentos, dispositivos médicos y cultivos de células de laboratorios.

El ensayo LAL depende de una proteína de la sangre del cangrejo herradura que se reacciona mediante la coagulación al entrar en contacto con las endotoxinas. Existen tres metodologías que se pueden usar para este ensayo: gel-clot, cinética-cromogénica y cinética-turbidimétrica. Este artículo comentará las diferencias entre estos tres métodos de detección, además de sus ventajas e inconvenientes para diferentes aplicaciones.

Detección gel-clot

Gel-clot es el ensayo LAL más simple y económico. Es un método de detección cualitativa en la que la formación de un gel indica la presencia de endotoxinas en una muestra. Mediante este método, el resultado positivo puede determinarse al momento sin necesidad de equipos de detección.

El método gel-clot no se puede usar de forma cuantitativa. Además, tiene una menor sensibilidad que los otros dos métodos, con un rango de detección entre 0,015 y 0,50 unidades de endotoxinas (EU) por ml de muestra. A pesar de estas desventajas, el método gel-clot sigue siendo la opción ideal para ensayos previos, rápidos e informales en el desarrollo del producto.

La serie PYROSTAR ES-F de FUJIFILM Wako ofrece una serie de kits que se pueden usar con el método de detección del gel-clot, incluidos los tubos de reacción gel-clot especializados. Incube la reacción durante una hora a 37 grados centígrados y gire los tubos para comprobar la formación de gel.

Detección turbidimétrica-cinética

El método cinético-turbidimétrico es un ensayo LAL cuantitativo. Es más sensible que el método gel-clot, con un rango de detección de hasta 0,001 EU/ml. La misma serie PYROSTAR ES-F se puede usar para el ensayo gel-clot o el cinético-turbidimétrico.

El principio de este método es que la turbidez de la solución de muestra aumenta antes de la formación de gel y el rápido aumento de la turbidez indica un mayor nivel de endotoxinas. Por lo tanto, la lectura cinética mediante un instrumento fotométrico como el Toxinometer®, puede cuantificar de forma precisa los niveles de endotoxinas con un alto grado de sensibilidad.

El método de detección cinético-turbidimétrico es una opción útil que se puede emparejar con el método gel-clot. Juntas, las dos metodologías permiten ensayos cualitativos y cuantitativos en varias etapas del proceso de desarrollo del producto mediante un único kit.

Detección cinética-cromogénica

El método de detección cinética-cromogénica utilizar un tinte de color para visualizar la reacción de coagulación. La misma cascada química que induce la coagulación también produce hidrólisis de un sustrato cromogénico. Esto libera un cromógeno amarillo que se puede visualizar mediante el lector de tubos Toxinometer® o un lector de placas.

La serie Limulus Color KY, que depende del método cinético-cromogénico, es muy sensible y puede detectar hasta 0,0002 EU/ml con el kit de ensayo único y 0,0005 EU/ml con el kit de ensayo múltiple.  A pesar de necesitar equipos de detección adicionales, el ensayo es sencillo de usar y permite una lectura cuantitativa. Es la mejor opción cuando se requiere la mayor precisión y sensibilidad.

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