Cómo evitar errores comunes con el ensayo LAL

El ensayo de Lisado de Amebocito Límulus (LAL) es el método más popular de detección y cuantificación de las endotoxinas bacterianas. Debe tenerse cuidado de evitar errores comunes con este ensayo que pueden causar resultados incorrectos. Este artículo resume cuatro consejos para evitar estos errores comunes y garantizar la precisión en sus datos LAL.

Error 1: Falsos positivos por hongos polisacáridos

El LAL depende de una reacción de coagulación que ocurre en presencia de endotoxinas. Sin embargo, los estudios han demostrado que un hongo polisacárido llamado (1→3)-β-D-glucano también produce coagulación, lo cual puede producir resultados de falsos positivos. Para evitar problemas, es importante usar reactivos que contengan altos niveles de (1→3)-β-D-glucanos y así minimizar su interferencia con el ensayo. Los kits de FUJIFILM Wako ahora incluyen altos niveles de este compuesto.

Error 2: Uso de la solución de extracción incorrecta

Para el ensayo de endotoxinas en dispositivos médicos, la superficie del dispositivo se enjuaga con una solución para extraer las endotoxinas. La selección de la solución de extracción puede tener un impacto considerable en los resultados del ensayo LAL. Por ejemplo, los estudios han demostrado que usar agua como solución de extracción puede permitir que ciertas sustancias interfieran con la reacción LAL. Los metales, aminoácidos, antibióticos y enzimas son fuentes potenciales de interferencias. El ensayo LAL de solución de extracción de endotoxinas de FUJIFILM Wako es muy efectivo para extraer endotoxinas a la vez que evita materiales que interfieren con el ensayo. Esta solución está recomendada para dispositivos médicos que puedan entrar en contacto con fluidos que contengan sangre o proteínas.

Error 3: Contaminación de endotoxinas por productos consumibles del laboratorio

Los productos consumibles del laboratorio pueden ser una fuente problemática de contaminación por endotoxinas durante los ensayos LAL. Todos los productos consumibles usados para el ensayo deben tener una certificación libre de endotoxinas detectables. Algunos productos están etiquetados como "apirogénicos", pero es importante comprobar el límite específico de endotoxinas usado para los ensayos y, en algunos casos, puede ser prudente probar los materiales antes de usarlos. La serie BioClean®, que incluye puntas de pipetas, tubos de ensayo y tapas, se ha probado para garantizar niveles de endotoxinas por debajo de 0,005 EU por producto. Específicamente, las puntas se han esterilizado con radiación gama y vienen empaquetadas individualmente en una película de protección contra el polvo.

Error 4: Errores en las series de dilución

Los errores de dilución durante la construcción de una curva estándar pueden producir errores considerables en los resultados del ensayo LAL. Para evitar estos errores, American Pharmaceutical Review recomienda que, antes de la liberación de un lote de lisado para el uso rutinario, la serie de dilución se cuantifique tres veces cada una por tres técnicos diferentes. Además, la concentración inicial y el tipo de dilución debe ser uniforme entre los diversos ensayos rutinarios. La curva estándar típica empieza en 1000 EU/ml.

LÍNEA DE PRODUCTOS LAL:

Puntas de pipeta sin endotoxinas BioClean® Series	PYROSTAR™ ES-F Prueba vial única	Agua reactivo LAL (LRW): Agua sin endotoxina