10 Escenarios en los que se puede utilizar el Ensayo LAL

Las endotoxinas provocan inflamación y fiebre y se han implicado en la patogenia de la sepsis. Son componentes importantes de la membrana externa de las bacterias gramnegativas y son ubicuas en el medio ambiente. La administración parenteral de endotoxinas está asociada con efectos negativos muy graves y potencialmente desastrosos. Por lo tanto, las pruebas de cribado de endotoxinas se realizan de forma rutinaria en la industria farmacéutica, así como en el contexto de la investigación. El ensayo de lisado de amebocitos de Limulus (LAL) es la prueba más utilizada para la evaluación de endotoxinas con validez y fiabilidad probadas. Se basa en la incubación de un extracto de amebocitos del cangrejo herradura con una muestra que contiene endotoxinas, lo que conduce a la formación de un coágulo¹.

A continuación, se muestran diez de los entornos en los que el ensayo LAL se ha utilizado ampliamente:

1. Para analizar las soluciones inyectables: Los productos farmacéuticos inyectables deben cumplir con límites muy estrictos para el contenido de endotoxinas. La contaminación por endotoxinas de las soluciones inyectables debe evitarse a toda costa, ya que de lo contrario provocaría fuertes efectos adversos, especialmente cuando los productos se administran por vía intravenosa.² Cuando no hay sustancias que interfieran en la formulación de un fármaco, las pruebas de LAL deben realizarse con muestras sin diluir. 

2. En los centros de diálisis renal: Tanto el agua como las soluciones de dializado utilizadas para la diálisis renal deben cumplir con estrictas normas de calidad, incluidos los límites de endotoxinas, porque los contaminantes pueden provocar resultados adversos muy graves para los pacientes.⁴

3. Para examinar los dispositivos médicos: Ciertos dispositivos médicos, como las válvulas cardíacas porcinas o los dispositivos ortopédicos complejos, conllevan el riesgo de contaminación por endotoxinas.² Los límites reglamentarios estrictos para las endotoxinas dependen del uso previsto del dispositivo y de los tejidos con los que viene contactar. Los dispositivos se pueden lavar, sumergir o desmontar para preparar los eluidos para la prueba.

4. Para evaluar fármacos recombinantes: Los fármacos recombinantes también pueden estar contaminados con endotoxinas. Esto se aplica especialmente a los medicamentos recombinantes producidos en E. coli, que requieren un paso de eliminación de endotoxinas. La contaminación y eliminación de endotoxinas se puede evaluar con el ensayo LAL.

5. Evaluación de terapias biológicas: Ciertas terapias biológicas, como la insulina, los factores de coagulación y algunas vacunas, también llevan un riesgo de contaminación por endotoxinas y deben probarse⁶. 

6. Avanzar en la investigación de las endotoxinas: Las endotoxinas y los mecanismos que intervienen en sus efectos son objeto de investigaciones activas. La evaluación de endotoxinas mediante el ensayo LAL es una parte importante de la investigación de endotoxinas.²

7. Detectar candidatos a fármacos antiendotoxinas: Dado que las endotoxinas tienen fuertes efectos pirogénicos, el desarrollo de fármacos antiendotoxinas optimizados es un área de investigación importante. El ensayo LAL permite el cribado de candidatos como fármacos antiendotoxinas antes de que puedan avanzar a otras fases de desarrollo de los fármacos.²

8. Para probar el equipo de laboratorio: Para asegurar resultados confiables de la investigación, el equipo de laboratorio debe estar libre de contaminación por endotoxinas. Por lo tanto, si surge la sospecha de contaminación, el ensayo LAL se puede utilizar para analizar el material de laboratorio en busca de endotoxinas.

9. Analizar el agua de mar: El agua de mar y los sedimentos marinos contienen endotoxinas. Además, la medición de endotoxinas con el ensayo LAL puede servir como indicador del contenido bacteriano del agua marina.^2,7

10. Para detectar la contaminación del aire por endotoxinas: La inhalación de endotoxinas puede provocar disfunción e inflamación de las vías respiratorias. Este problema surge más comúnmente debido a la exposición ocupacional, pero también puede ocurrir en áreas cercanas a fuentes que emiten endotoxinas. 

Referencias bibliográficas:

1. https://www.fda.gov/inspections-compliance-enforcement-and-criminal-investigations/inspection-technical-guides/bacterial-endotoxinspyrogens
2. Novitsky TJ. Biomedical applications of Limulus Amebocyte lysate. J.T. Tanacredi et al. (eds.), Biology and Conservation of Horseshoe Crabs, DOI 10.1007/978-0-387-89959-6_20, Springer Science+Business Media, LLC 2009
3. FDA. Guidance for industry: pyrogen and endotoxins testing: questions and answers. June 2012.
4. Coulliette AD, Arduino MJ. Hemodialysis and water quality. Semin Dial. 2013;26(4):427-38. doi: 10.1111/sdi.12113.
5. Sandle T. Removal of endotoxin from protein in pharmaceutical processes. American Pharmaceutical Review. 2016, July 29.
6. Trivedi B, Valerio C, Slater JE. Endotoxin content of standardized allergen vaccines. J Allergy Clin Immunol. 2003;111(4):777-83. doi: 10.1067/mai.2003.1338.
7. Sattar AA, Jackson SK, Bradley G. The potential of lipopolysaccharide as a real-time biomarker of bacterial contamination in marine bathing water. J Water Health 2014;12(1):105–112. doi: https://doi.org/10.2166/wh.2013.142