Comparando o Método LAL com o Teste de Pirogênio em Coelhos

Os lipopolissacarídeos (LPS) são um constituinte da parede celular bacteriana. São liberados durante a infecção e são um fator significativo na causa de febre e choque séptico. A molécula de LPS é composta por três componentes: um polissacarídeo, um oligossacarídeo central e uma porção lipídica A. É a porção lipídica A que dá ao LPS suas propriedades tóxicas e pirogênicas. O controle de qualidade exige a detecção de LPS em preparações parenterais de vacinas, garantindo assim sua segurança e eficácia. Quando se trata de detectar endotoxinas, o Teste de Pirogênio de Coelho (RPT) e o ensaio de Lisado de Amebócitos Limulus (LAL) são dois procedimentos frequentemente empregados.[1, 2]

Teste de Pirogênio de Coelho (RPT)

O RPT é uma técnica qualitativa que identifica a existência de pirogênios contaminantes (que causam febre) em preparações parenterais. O processo envolve a medição das variações de temperatura em coelhos depois de receberem uma amostra teste. O teste foi adicionado à Farmacopeia dos EUA em 1942 como resultado do aumento do uso de soluções intravenosas durante a Segunda Guerra Mundial. Por meio de refinamento contínuo, os métodos farmacopeios foram atualizados para incorporar a triagem de coelhos, reduzindo efetivamente os falsos positivos.[3]

Modelos animais são frequentemente usados para replicar como os humanos respondem a doenças e medicamentos. Os coelhos foram selecionados para o teste de pirogênio, pois sua sensibilidade à endotoxina se assemelha muito à dos humanos.[3]

Desvantagens: Além da precisão dos resultados, a principal desvantagem é o envolvimento de animais no procedimento, cada teste de dissolução requer três animais. As principais razões para procurar uma alternativa ao RPT são sua precisão em questão e a potencial violação da proteção animal.[4]

A presença de várias substâncias, tanto internas quanto externas, pode afetar a temperatura dos coelhos, complicando assim o uso desse teste para detectar endotoxinas em uma amostra. 

Este método não é adequado para detectar pirogênios em medicamentos como esteroides e quimioterápicos, que pertencem a um grupo de substâncias que podem desencadear um aumento de temperatura nos organismos após a administração, apresentando uma limitação significativa.

Lisado de Amebócito Limulus (LAL)

O sangue azul do caranguejo-ferradura é altamente valorizado pela indústria biomédica como um recurso natural e insubstituível. O Lisado de Amebócito Limulus (LAL) produzido por células sanguíneas de caranguejo-ferradura é um mecanismo de detecção altamente avançado usado para detectar componentes da parede celular bacteriana e fúngica com sensibilidade excepcional. O uso de testes LAL melhorou muito o controle de qualidade de medicamentos farmacêuticos e de dispositivos médicos, substituindo efetivamente o teste de pirogênio de coelho.[5]

Este teste rapidamente se tornou o método preferido para detectar endotoxinas bacterianas devido ao seu baixo limite de detecção, especificidade aprimorada, custo-benefício, resultados consistentes e capacidade de quantificar os níveis de endotoxinas. As implicações éticas deste teste significam que o processo de extração da hemolinfa não prejudica o bem-estar dos caranguejos,mesmo que haja animais envolvidos.

Os kits de teste único e multiteste PYROSTAR™ ES-F, usando o método de gel-coágulo LAL, oferecem uma abordagem direta e podem detectar sensibilidades que variam de 0,015 a 0,25 UE/Ml. Instalações de saúde, empresas farmacêuticas e outras indústrias o usam para confirmar a ausência de endotoxinas em seus produtos e arredores. Estudos demonstraram que o teste LAL é cinco vezes mais sensível na detecção de pirogênios em comparação com o Teste de Coelho.[6]

Referências

1. Park, C.Y., et al., Comparison of the rabbit pyrogen test and Limulus amoebocyte lysate (LAL) assay for endotoxin in hepatitis B vaccines and the effect of aluminum hydroxide. Biologicals, 2005. 33(3): p. 145-51.
2. Cadenas, S. and A.M. Cadenas, Fighting the stranger-antioxidant protection against endotoxin toxicity. Toxicology, 2002. 180(1): p. 45-63.
3. Vipond, C., et al., Limitations of the rabbit pyrogen test for assessing meningococcal OMV based vaccines. Altex, 2016. 33(1): p. 47-53.
4. Valentini, S., et al., Monocyte-activation test to reliably measure the pyrogenic content of a vaccine: An in vitro pyrogen test to overcome in vivo limitations. Vaccine, 2019. 37(29): p. 3754-3760.
5. Tamura, H., J. Reich, and I. Nagaoka, Outstanding Contributions of LAL Technology to Pharmaceutical and Medical Science: Review of Methods, Progress, Challenges, and Future Perspectives in Early Detection and Management of Bacterial Infections and Invasive Fungal Diseases. Biomedicines, 2021. 9(5).
6. Karesh, S.M.J.J.o.n.m.t., Sterility and pyrogen testing of radiopharmaceuticals. 1989. 17(3): p. 156-159.